Coloration de Gram

Cette procédure décrit comment réaliser une coloration de Gram.

La coloration de Gram est utilisée :

• pour classer les bactéries en fonction de leur forme, taille, morphologie et propriétés de Gram afin de faciliter leur identification
• pour faire un diagnostic rapide et présomptif de l’infection
• Pour évaluer la qualité des échantillons cliniques

La coloration de Gram est une coloration différentielle qui permet de classer les bactéries en deux grands groupes, le groupe Gram positif et le groupe Gram négatif. Cette classification est basée sur leur réaction à la coloration causé par les différences de structure de leurs parois cellulaires. Les bactéries Gram positif ont une enveloppe cellulaire épaisse de peptidoglycane et aucune membrane à l’extérieur de leur enveloppe cellulaire. Le cristal violet et le lugol (solution d’iode) forment un complexe soluble dans l’alcool qui se lie à cette couche de peptidoglycane. L’alcool-acétone n’a pas d’effet décolorant sur le complexe colorant, de sorte que les bactéries Gram-positives conservent la coloration violette. Les bactéries Gram-négatives ont un lipopolysaccharide sur la membrane qui recouvre l’enveloppe cellulaire et seulement une fine couche de peptidoglycane qui ne peut pas retenir la coloration violette. Les bactéries gram-négatives seront décolorées par l’alcool-acétone et prendront le contre-colorant safranine ou fuchsine (couleur rouge). Les agents décolorants et les contre-colorants peuvent différer. Dans cette procédure, nous utilisons le kit de coloration de Gram de bioMérieux, contenant du cristal violet, de la lugol-polyvinyl-pyrrolidone stabilisée, de l’alcool-acétone et de la safranine.